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文檔分類:論文

羊駝來源的天然未免疫及免疫后納米抗體文庫的構建.pdf


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羊駝來源的天然未免疫及免疫后納米抗體文庫的構建.pdf
文檔介紹:
中山大學碩士學位論文


羊駝來源的天然未免疫及免疫后
納米抗體文庫的構建


Construction of Naïve and Immune Nanobody Libraries
Using Alpaca (Lama pacos) as a Convenient Source


專業名稱:免疫學
申 請 人:劉競帆
指導教師:王榮福 教授


答辯委員會(簽名)
主席:
委員:

中山大學中山醫學院
2017 年 5 月 11 日
學位論文原創性聲明

本人鄭重聲明:所呈交的學位論文,是本人在導師的指導下,獨立進行研究工
作所取得的成果。除文中已經注明引用的內容外,本論文不包含任何其他個人或集
體已經發表或撰寫過的作品成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體,均已
在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。

學位論文作者簽名:

日期: 年 月 日
摘要
羊駝來源的天然未免疫及免疫后納米抗體文庫的構建
專業名稱:免疫學
碩 士 生:劉競帆
指導教師:王榮福 教授
摘要
抗體是在抗原的刺激下,由機體免疫系統中的漿細胞產生的,可以與相應抗原
發生特異性結合的一種免疫球蛋白。納米抗體是一種由駱駝科動物體內重鏈抗體
的可變區基因克隆得到的重組單域抗體,是目前已知的能與抗原結合的最小片段。
其分子量小,結構簡單,僅由重鏈可變區一個結構域組成,即可正常發揮抗體的功
能。此外,經過人工改造的納米抗體親和力高于普通抗體,組織穿透力強,對人體
的免疫原性弱,并且可以比較容易地進行改造和擴增,因此可以代替普通抗體,發
揮更佳的作用。
納米抗體可以使用多種純化方式獲得,其中最為常用的就是噬菌體展示技術。
噬菌體展示技術是一種傳統的生物學技術,利用該技術進行抗體篩選的研究已有
不少進展。使用分子克隆技術,構建噬菌體展示納米抗體文庫,即可從中篩選得到
特異性的納米抗體。得到的噬菌體克隆可以通過感染大腸桿菌來表達納米抗體,大
大降低了抗體生產的成本。
目前人們常用的抗體來源大多為小鼠和人類,納米抗體的來源則大多為駱駝
或美洲駝。羊駝的體內也存在著天然的重鏈抗體,并且該動物的體積小,性格溫順,
易飼養,被認為是納米抗體的最佳來源之一。羊駝來源的納米抗體研究在國外已有
一些進展,但在國內研究較少。在本文中,我們使用未免疫的天然羊駝外周血淋巴
細胞為來源,構建了庫容量達 1.4*109 c.f.u.的天然非免疫的納米抗體文庫(Naïve
library)。此外,我們還用融合了 Flag 標簽和 His 標簽的 GFP 蛋白對羊駝進行免
疫,并使用免疫后的羊駝外周血淋巴細胞為來源,構建了庫容量達 1.7*1010 c.f.u.的
I
摘要
免疫后納米抗體文庫(GFP-Flag-His immune library),且達到了較高的序列多樣性
水平,可以用于篩選任何一種動物的任何蛋白的特異性納米抗體。同時,我們使用
GFP-Flag-His 免疫后文庫進行了初步的篩選工作,成功富集到兩條蛋白序列,證實
了該文庫確實可以用于納米抗體的富集,并成功在課題組內建立起噬菌體展示
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